نحوه استفاده از لومینو متر (میکروب سنج)

سیستم های تصویربرداری با وسترن بلات قبلاً برای اندازه گیری سیگنال های سنجش میکروپلیت پلاستیک سازگار شده اند. این می تواند یک اندازه گیری صرفه جویی در هزینه باشد زیرا سیستم های تصویربرداری با وسترن بلات تجهیزات آزمایشگاهی متداول هستند و در صورت عدم دسترسی به سیستم ، می توانند یک چراغ سنج اختصاصی را جایگزین کنند. یکی از محدودیت های قبلاً شناخته نشده این است که سیگنال های ضبط شده توسط دوربین ها در این سیستم ها برای همه چاه ها برابر نیستند. سیگنال ها به زاویه بروز دوربین و در نتیجه محل چاه روی میکروپلیت بستگی دارند. در اینجا ما نشان می دهیم:

• موقعیت یک چاه روی یک میکروپلیت به طور قابل توجهی سیگنال گرفته شده توسط یک سیستم تصویربرداری متداول وسترن بلات را از روش سنجش نورانی تأثیر می گذارد.
• اثر موقعیت چاه به راحتی قابل اصلاح است.
• این روش را می توان برای سنجش های درخشان تجاری در دسترس استفاده کرد ، و این امکان را برای اندازه گیری توان بالا از طیف گسترده ای از فرآیندهای بیولوژیکی و واکنشهای بیوشیمیایی فراهم می آورد.
قابل اعتماد و متخصص:
جزئیات روش
اطلاعات پس زمینه
سنجش های درخشان یک روش ساده ، حساس و پر توان برای اندازه گیری طیف گسترده ای از فرآیندهای بیولوژیکی ارائه می دهد. از آنجا که نور ساطع شده از سنجشهای درخشان نتیجه یک واکنش شیمیایی یا بیوشیمیایی است ، نسبت به سایر روشهای تشخیص سنجش مانند جذب یا فلورسانس منحصر به فرد پیچیده تر است. این روش ها به تجهیزاتی نیاز دارند که حداقل دارای منبع و سنسور نور باشند ، در حالی که برای تشخیص نور لامپ فقط به یک سنسور نیاز دارد. اینکه آیا یک سنجش گزارشگر مبتنی بر لوسیفراز برای مطالعه بیان ژن یا روش لومینو متر شیمیایی نور برای اندازه گیری واکنشهای بیوشیمیایی استفاده می شود ، به طور کلی تصور می شود که یک اسپکتروفتومتر که توانایی تشخیص سیگنال لومینسانس را دارد ، مورد نیاز است. گزارش های قبلی نشان داده اند که دستگاه های ارزان قیمت معمولی ، مانند تلفن های هوشمند ، می توانند جایگزین تجهیزات معمولی گران قیمت شوند [1] ، [2]. از سادگی اندازه گیری لومینسانس می توان استفاده کرد ، زیرا سایر تجهیزات ، از جمله دوربین های CCD ، می توانند نور ساطع شده از یک واکنش درخشان را به یک سیگنال دیجیتال برای تعیین کمیت تبدیل کنند. پیش از این نشان داده شده بود که یک سیستم تصویربرداری با وسترن بلات می تواند برای تشخیص و اندازه گیری قابل اعتماد سیگنال های درخشان سازگار باشد [3]. اگر استفاده از یک قطعه معمولی از تجهیزات آزمایشگاهی مانند این وجود داشته باشد ، در صورت عدم حضور یک لامپومتر اختصاصی می تواند ترجیح داده شود. اگرچه این روش دارای عملکرد قابل مقایسه با یک نور سنج اختصاصی است ، در هنگام اندازه گیری تعداد زیادی از چاه های میکروپلیت ، یا اگر چاه های اندازه گیری شده فاصله زیادی دارند ، منبع خطای دیگری معرفی می شود. همانطور که در شکل 1 نشان داده شده است ، ظاهر دوربین یک چاه میکروپلیت به زاویه بروز خود دوربین بستگی دارد. چاه هایی که در نزدیکی محور نوری لنز قرار گرفته اند نمای کاملی از محتوای چاه نشان می دهند ، در حالی که محتوای چاههای بیشتر از محور نوری تا حدی در یک طرف چاه مسدود شده و سیگنال از دیواره خلاف آن منعکس می شود. سمت. این خطای پرسپکتیو ، که از آن به عنوان اثر موقعیت نیز یاد می کنیم ، به دلیل لنز آنتوسنتریک مورد استفاده در دوربین های معمولی است. با تعویض عدسی entocentric با یک لنز telecentric می توان این اثر چاه را به صورت نوری از بین برد. برخلاف لنزهای تلسکوپی ، پرتوهای اصلی از یک شیء به موازات محور نوری لنزها هستند ، به معنای بزرگنمایی و چشم انداز بدون در نظر گرفتن فاصله عمود بر اشیاء با محور نوری سازگار است. قبلاً از لنزهای تله سانتریك برای تصویربرداریهای بیولوژیكی و كاربردهای سنجش استفاده شده است. سیستم به جای خرید یک چراغ سنج. در اینجا ما یک روش بهبود یافته از سنجش سنجش لومینسانس را با استفاده از یک سیستم تصویربرداری متداول ، اصلاح نشده ، وسترن بلات که برای این اثر موقعیت چاه اصلاح می کند ، ارائه می دهیم ، و با افزایش دقت اندازه گیری ها در یک میکروپلیت.

عکس. 1
در یک پنجره جداگانه باز کنید
عکس. 1
نمایش نمایه یکنواخت چاه ها از نرم افزار کسب. (الف) نمای قطعه ای از ریزگرد سیاه چاه 96. هر چاه حاوی مخلوط 2: 1 v: v از محلول شیمیایی و نور آنتی بادی ضد خرگوش کونژوگه شده با HRP (1: 8000 v: v در TBST) برای حجم نهایی 100 میکرولیتر است. (ب) نمای قطعه ای از میکروپلیت سیاه 384 چاه. هر چاه حاوی مخلوط 2: 1 v: v از محلول شیمیایی و نور آنتی بادی ضد خرگوش کونژوگه شده با HRP (1: 8000 v: v در TBST) برای حجم نهایی 40 میکرولیتر است. اثر چاه موقعیت در مقایسه چاه های مرکز با چاه های لبه یا گوشه مشهود است. جعبه های قرمز نمونه هایی از منطقه انتخاب شده برای اندازه گیری در نرم افزار کمیت است.

راه اندازی تجهیزات
یک میکروپلیت رنگ سیاه و سفید 96- یا 384 چاه کاستار روی سیستم عامل تصویربرداری با وسترن بلات (G: BOX ، Syngene ، Frederick، MD) قرار گرفت. با استفاده از نرم افزار اکتساب زنده ، میکروپلیت در مرکز دید دوربین قرار گرفت تا همه چاهها

نحوه استفاده از لومینو متر (میکروب سنج)